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    什么是科學合理的乳酸菌檢測方法

    2012/5/13 16:10:55   文章來源:原創   作者:強微生物   瀏覽次數:14099
    【字號:  
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    科學的乳酸菌檢測方法;
        強微公司采用的是透明圈檢測方法,是一種自找麻煩、自討苦吃、很吃虧的檢測方法,檢測出來的結果比國內普遍采用的平板涂布法的結果要少10%左右,即使是這樣,我們仍然堅持這種更為科學的檢測方法;
    1. 透明圈檢測法(我公司檢測方法),和平板涂布法(國內普遍采用的方法)的區別
        ① 透明檢測法:是我公司對糞腸球菌的檢測專利技術(專利申請號:201010619741.X),采用在瓊脂營養培養基中添加碳酸鈣作為檢測培養基,同時采用稀釋2億倍的樣品菌懸液1毫升,與上述碳酸鈣營養瓊脂培養基混合,傾注平板的方法,計算在碳酸鈣平板培養基中培養48小時,并產生乳酸鈣透明圈的菌落,即為乳酸糞腸球菌活菌落的科學檢測和計數方法。
        ② 平板涂布檢測法:是國內同行普遍采用的檢測方法,與透明圈檢測方法的區別是,直接使用瓊脂營養培養基作為檢測培養基,不添加碳酸鈣,其次,制作培養平板的方法是在已凝固的平板培養基上面,注入0.1毫升稀釋適當倍數后的菌懸液,用無菌玻璃刮鏟將菌懸液均勻地涂于瓊脂表面(也叫涂抹平板計數法),再增培養48小時,長出菌數即算為乳酸菌;
        可見,兩種檢測方法的區別有以下幾個:
        ① 培養基有所不同:透明圈檢測方法添加了碳酸鈣,而平板涂布檢測方法沒有添加碳酸鈣;
        ② 制作平板的方法有所不同:透明圈檢測方法是采用樣品菌液與呈溶解狀態的培養基混合,傾注平板的方法;而平板涂布檢測方法是采用在已凝固好的平板培養基上,注入0.1毫升樣品菌液,用玻璃刮鏟涂布的方法;
        ③ 最終長出來的菌落特征有所不同:透明圈檢測方法長出的乳酸菌菌落周圍有一圈明顯的透明圈,透明圈越大,說明產乳酸能力越強;而平板涂布檢測方法長出來的菌落周圍沒有透明圈,與普通細菌長出的菌落沒有區別,無法直接鑒定是否是乳酸菌。
        ④ 最終還有一個區別,就是檢測出來的結果上有區別,采用透明圈檢測方法檢測出來的結果,比采用平板涂布法檢測出來的結果要少很多,幾乎少了10%以上;
    2.2 檢測方法的科學性對產品判斷至關重要
        我們認為,采用透明圈檢測方法是最科學的檢測方法,是最能反映出乳酸菌活性的方法,而目前國內比較普遍的檢測方法是平板涂布法,并不能直接說明所長出來的菌落就是乳酸菌,也不能直接反映乳酸菌的活性如何;
        我公司在生產,銷售等過程中,采用的乳酸菌檢測方法一律為透明圈檢測方法,雖然這種方法檢測出來的結果,與國內普遍采用的檢測方法要低10%左右,但我們一如既往,即使在外人看起來這是明顯的吃虧,自己給自己找麻煩,但我們仍然堅持自己的看法:即透明圈檢測方法是最科學的乳酸菌檢測方法;
     
        用透明圈檢測出來的乳酸菌的含菌量與價格是成正比的, 與產品是否包埋保護處理也是成正比的
        含乳酸菌越高,價格越貴,但這一點還是次要的,更為重要的是:產品是否采用了包埋和保護技術,對乳酸菌產品來說是非常關鍵的,因為乳酸菌非常容易在運輸保存和制粒過程中損失殆盡;有些產品雖然含菌量非常高,但卻也很脆弱,容易失活,這也是沒有意義的產品。
     
         透明圈乳酸菌檢測方法簡述如下:
     ①、檢測培養基:蛋白胨15g,牛肉膏5g,葡萄糖20g,氯化鈉5g,碳酸鈣10g,瓊脂粉10g,水1000ml,115~121℃滅菌20min,滅菌后放置水浴52℃保溫備用。
    ②、稀釋方法:取1克樣品放入添加99ml無菌水的帶玻璃珠的250ml三角瓶中,搖床180rpm震蕩30min,即為10-2樣品溶液,再從中取1ml至添加99ml無菌生理鹽水的三角瓶中,稀釋至10-4,以此類推稀釋至10-8,即稀釋了1億倍
    ③、倒制培養平板,從上述已稀釋了1億倍的乳酸菌懸液中取1ml,在無菌操作臺上注入90mm培養皿中,再將已經滅了菌的保持在52℃水浴鍋中的呈溶解狀態的培養基,倒入15毫升左右于培養皿中,全部浸到培養皿,與菌懸液充分混合均勻(倒入培養基后,馬上用手轉動培養皿,轉動幾下,讓其混合均勻),然后等其凝固再移入培養箱中培養,注意最后一步倒平皿必須在超凈臺無菌操作,以免雜菌污染。每次稀釋均要換滅好菌的移液管。
    ④、培養條件:33℃恒溫培養箱培養48~72h
    ⑤、培養完畢后,取出進行計數,因為是稀釋了1億倍,所以一個透明圈菌落代表1億/克,如果有200個透明圈,則是200億/克;注:對于我公司300億/克的乳酸糞腸球菌產品,需要稀釋2億倍才行。
    這才是真正檢測乳酸菌的方法,而且檢測出來的乳酸菌是真正的活菌,不含死菌。
    培養后的乳酸菌在培養皿上會產生透明圈,見下圖,圖中,一個白色菌落對應一個透明圈,圖中培養皿上的數字是我們的檢測人員對菌落計數的結果,即當個培養皿上的菌落數量,有的透明圈連成了一片。
     

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