飼料制粒對乳酸糞腸球菌復合制劑存活率影響試驗報告
（江西農業大學江西省高校動物營養重點實驗室 南昌 330045）
（宜春強微生物科技有限公司 宜春 336000）
筆者注：本試驗是探討強微復合菌中的乳酸菌部分，對飼料制粒的耐受性試驗，是強微公司與江西農大協同創新產學研合作項目之一。
摘 要：為了解飼料制粒對乳酸糞腸球菌復合制劑存活率影響，試驗設計10-2、10-3、10-4、10-5等4個稀釋倍數，采用MH培養和平皿活菌計數法測定雛鵝和成鵝配合飼料制粒前后乳酸糞腸球菌復合制劑存活率。結果表明：雛鵝飼料制粒后乳酸糞腸球菌復合制劑存活率為73.28%（制粒條件78～85℃，調質3分鐘）；成鵝飼料制粒后乳酸糞腸球菌復合制劑存活率為14.07%（制粒條件90～95℃，調質3分鐘）。表明乳酸糞腸球菌復合制劑經過制粒后，隨著制粒條件的不同，對其存活率的影響有顯著的差別，尤其是成鵝飼料中存活率顯著降低，但在雛鵝顆粒飼料制粒條件下，乳酸糞腸球菌具有極高的存活率，具有實用性價值。
關鍵詞：乳酸糞腸球菌復合制劑；飼料制粒；存活率
1、材料
1.1 乳酸糞腸球菌復合制劑
由宜春強微公司生產，主要由乳酸糞腸球菌、酵母菌、芽孢桿菌（枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌組成，添加量為150克/噸。
1.2 鵝配合飼料制粒
鵝配合飼料制粒在江西格力特飼料有限公司進行。
制粒條件：雛鵝顆粒飼料制粒條件78～85℃，調質3分鐘；成鵝制粒條件90～95℃，調質3分鐘，水份15%。
1.3 培養基
MH培養基、瓊脂粉，購自長城生物公司；0.9%NaCl生理鹽水，由本實驗室自行配制，121℃高壓滅菌30min，室溫備用。
1.4 主要設備
電熱恒溫培養箱，高壓蒸汽滅菌器，微量移液器等
2、方法：采用常規平皿活菌計數法。
2.1 樣品稀釋：每個樣品準備6支中號預先高壓滅菌的試管于試管架上，每支試管加入無菌生理鹽水4.5ml備用。
再將樣品均勻碾碎，取0.5g碾碎的樣品，放入上述加有4.5ml無菌生鹽水的第一支試管中，混勻；然后取出0.5ml置于第二支試管，混勻。以此例推，稀釋到第五支試管，5支試管的樣品稀釋度分別為：10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2.2 制作平板： 在10-2~10-5四個稀釋度各取0.1mL，加入無菌平皿，將溶化后冷卻至50℃的MH培養基迅速傾注平皿，小心混勻。置37℃恒溫培養24小時，觀察并記數。每個稀釋度做兩次，以平均數計算結果。
2.3 菌落計數及判別標準
依據稀釋度，根據以下標準進行判斷。試驗中，只取0.1mL做稀釋，所以每mL計數結果，應等于平均菌落數×稀釋度×10。
2.3.1 如只有一個稀釋度平均菌落數在30~300之間，則以此稀釋度作為試驗結果計數；
2.3.2 如有兩個相鄰稀釋度菌落平均數均在30~300之間，則計算二個菌落平均數的比值。如比值＜2，則應報告兩個稀釋計的平均菌落數；如比值＞2，則應報告兩個稀釋度中較大菌落數；
2.3.3 如所有稀釋度平均菌落數都大于300，則按最高稀釋度的平均菌落數計算；
2.3.4 如所有稀釋度平均菌落數都小于30，則按最低稀釋度平均菌落數計算；
2.3.5 如所有稀釋度均不在30~300之間，有大于300的，也有小于30的，則以最接近30或300的平均菌落數計算。
2.3.6 如所有稀釋度均未見菌落生長，則應報告結果小于10，而不是0。
2.4 乳酸糞腸球菌復合制劑制粒前、后存活率計算：
乳酸糞腸球菌復合制劑存活率＝制粒后菌落總數/制前菌落總數×100%。
3、結果
3.1、雛鵝飼料制粒前、后乳酸糞腸球菌復合制劑菌落數及存活率
雛鵝飼料制粒前、后乳酸糞腸球菌復合制劑菌落數測定數據見表1。
表1 雛鵝配合飼料制粒前、后乳酸糞腸球菌復合制劑菌落數（CFU/g）
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稀釋倍數
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10-3
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10-4
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10-5
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10-6
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制粒前
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第1次
|
361
|
39
|
3
|
0
|
|
第2次
|
397
|
47
|
0
|
0
|
|
平均數
|
379±25.5
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43±5.7
|
1.5±2.1
|
0
|
|
顆粒料
|
第1次
|
242
|
31
|
2
|
0
|
|
第2次
|
260
|
32
|
5
|
0
|
|
平均數
|
251±12.7
|
31.5±0.7
|
3.5±2.1
|
0
|
依據判斷標準，制粒前樣品只有在稀釋倍數為10-4時菌落數在30~300之間，所以選擇該稀釋度為計數結果，即制粒前活菌數＝（43.0±5.7）×104 CFU/g；制粒后樣品也是在在稀釋倍數為10-4時菌落數在30~300之間，所以選擇該稀釋度為計數結果，即制粒后活菌數＝（31.5±0.7）×104 CFU/g；據此計算雛鵝飼料制粒前、后乳酸糞腸球菌復合制劑存活率＝73.28%。
3.2、成鵝飼料制粒前、后乳酸糞腸球菌復合制劑菌落數及存活率
成鵝飼料制粒前、后乳酸糞腸球菌復合制劑菌落數及存活率測定結果見表2。
表2：成鵝配合飼料制粒前、后乳酸糞腸球菌復合制劑菌落數（CFU/mL）
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稀釋倍數
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10-3
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10-4
|
10-5
|
10-6
|
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制粒前
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第1次
|
375
|
65
|
1
|
0
|
|
第2次
|
436
|
75
|
0
|
0
|
|
平均數
|
405.5±43.1
|
70±0.7
|
0.5±0.7
|
0
|
|
顆粒料
|
第1次
|
87
|
15
|
0
|
0
|
|
第2次
|
110
|
13
|
0
|
0
|
|
平均數
|
98.5±16.3
|
14±1.4
|
0
|
0
|
依據判斷標準，制粒前只有在稀釋倍數為10-4時菌落數在30~300之間，所以選擇該稀釋度為計數結果，即制粒前活菌數＝（70.0±0.7）×104 （CFU/g）；制粒后只有在稀釋倍數為10-3時菌落數在30~300之間，所以選擇該稀釋度為計數結果，即制粒后活菌數＝（98.5±16.3）×103 （CFU/mL）；益生菌存活率＝14.07%。
4、小結
雛鵝飼料制粒后乳酸糞腸球菌復合制劑存活率為73.28%（制粒條件78～85℃，調質3分鐘）；成鵝飼料制粒后乳酸糞腸球菌復合制劑存活率為14.07%（制粒條件90～95℃，調質3分鐘）。表明乳酸糞腸球菌復合制劑經過制粒后，隨著制粒條件的不同，對其存活率的影響有顯著的差別，尤其是成鵝飼料中存活率顯著降低，但在雛鵝顆粒飼料制粒條件下，具有極高的存活率，具有實用性價值。
分析：雛鵝飼料中由于大多原料均已是熟化原料，所以，對制粒的溫度要求不高，調質時間要求也不高，所以，乳酸糞腸球菌的存活率水平比較高。而成鵝飼料由于飼料多為生料，以及粗纖維含量，所以，要求的制粒溫度和調質時間比較高和長，所以，存活率相對低一些；
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